一、介紹

小鼠精原細胞（GC-1 spg）為貼壁細胞，細胞形態呈上皮細胞樣。

二、主要耗材、儀器及試劑

15ml離心管、50ml離心管、凍存管、巴氏滴管、培養瓶、封口膜、CO2培養箱、離心機、顯微鏡、生物安全柜、DMEM、胎牛血清（FBS）、PBS緩沖液、青-鏈霉素（雙抗）、胰蛋白酶、二甲基亞砜（DMSO）等等。

三、培養流程

1. 細胞復蘇

1)擦拭生物安全柜臺面，準備好所需耗材，紫外30min，打開37℃恒溫水浴箱預熱所用試劑；

2)按照DMEM＋10% FBS＋1% P/S的比例配制血清培養基，吹打混勻后按10倍細胞的體積分裝至15ml離心管中；

3)從液氮中取出GC-1 spg細胞，在水浴箱中快速晃動使其融化；

4)將細胞懸液轉移至提前分裝有血清培養基的離心管中，吹打混勻；

5)1200rpm，離心3min；

6)棄去廢液，向離心管中重新加入新的培養基，重懸GC-1 spg細胞沉淀，并轉移至培養瓶中進行培養。

2. 細胞傳代

1)細胞密度超過80%即可進行傳代，拿出細胞，棄去舊培養液；

2)用PBS沖洗細胞2-3次（動作要輕柔，清洗時可搖晃培養瓶以保證清洗效果）；

3)棄去廢液，向培養瓶中加入事先預熱好的胰蛋白酶（用量要足以覆蓋細胞層），輕輕晃動培養瓶以利于消化；

4)1min左右后在顯微鏡下觀察細胞，當90%細胞被消化下來時，向培養瓶中加入2-3ml的血清培養基，終止消化；

5)收集細胞懸液至15ml離心管中，1200rpm，離心3min；

6)等待離心過程中，可提前在新的培養瓶中加好完培（如T25培養瓶可先加4ml完培）；

7)棄去廢液，用2ml的完培重懸細胞后分裝至新的培養瓶中；

8)蓋上培養瓶蓋子，以劃“十字"的方式晃動培養瓶，以使細胞分布均勻，置于37℃，5%-10%CO2培養箱中進行培養。

3. 細胞凍存

1)從培養箱中取出培養瓶，棄去舊的培養液，用PBS清洗2-3次；

2)加入預熱的胰蛋白酶消化細胞，鏡下觀察消化后加入2-3ml完培終止消化；

3)收集細胞懸液至15ml離心管中，1200rpm，離心3min；

4)等待離心過程中，按照55% DMEM+40%FBS+5%DMSO的比例配制凍存液；

5)離心結束后，棄去上清，向離心管中加入凍存液，重懸細胞，分裝至凍存管中；

6)將凍存管放入程序降溫盒中（“慢凍"），置于-80℃冰箱中，第二天即可拿出細胞置于液氮罐中保存。

四、注意事項

1．培養細胞所用的培養基及血清等試劑最好沿用之前的，切忌頻繁更換；

2．棄去舊的培養液時最好不要直接倒掉，以免瓶口有殘留造成污染；

3．用胰酶消化細胞時，可輕輕晃動培養瓶，并在顯微鏡下觀察，細胞間隙變大，輕晃培養瓶細胞可自然流下時即可終止消化，切忌劇烈拍打培養瓶；

4．對于難消化的細胞可以分兩次進行消化，以防胰酶消化時間過長對細胞造成損傷；

5．一定要分清細胞培養瓶的正反面。

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業。總部設在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司，旨在為生命科學的發展提供較好的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線，在各個領域內向用戶提供較高的水平和質量穩定的產品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶提供各種產品、技術支持與服務。

可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業資訊和完備的產品和物流服務。 專業的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產品推薦給國內從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業性的產品供應商，公司出資存備了大量現貨，配合優秀的銷售隊伍以及專業的技術支持，隨時為客戶提供服務。