今天我們要來(lái)聊一下細(xì)胞結(jié)構(gòu)里面的一個(gè)神秘小東西-脂滴

沒錯(cuò)沒錯(cuò)，你沒看錯(cuò)！這就是那些小小的圓圓的、像是浸泡在脂肪里的小球球！它們的外觀看起來(lái)就像是脂肪掉進(jìn)了細(xì)胞里，而且它們還有著各種神奇的功能。

那么，脂滴到底是什么呢？它們是由一種叫做“脂質(zhì)"的化學(xué)物質(zhì)組成的。脂滴是脂質(zhì)和能力穩(wěn)態(tài)中心的儲(chǔ)存細(xì)胞器。它們具有不一樣的結(jié)構(gòu)，由中性脂質(zhì)的疏水核心組成，該核心由磷脂單層包圍，磷脂單層由一組特定的蛋白質(zhì)修飾。脂質(zhì)本質(zhì)上就是脂肪酸和甘油的混合物，它們?cè)诩?xì)胞里的主要功能就是作為能量?jī)?chǔ)備。

脂滴不僅僅是細(xì)胞內(nèi)的能量?jī)?chǔ)備庫(kù)，它們還可以幫助細(xì)胞進(jìn)行重要的功能。如蛋白質(zhì)降解、隔離轉(zhuǎn)錄因子和染色質(zhì)成分以及為某些核受體生成脂質(zhì)配體。此外，病毒核衣殼蛋白核心本身可與脂滴表面結(jié)合并協(xié)調(diào)病毒感染的持續(xù)傳播。它們可以幫助調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的代謝過(guò)程，幫助細(xì)胞在不同的生理狀態(tài)下更好地運(yùn)作。此外，脂滴還可以作為一種儲(chǔ)存信號(hào)分子的地方，這些信號(hào)分子可以在需要的時(shí)候釋放出來(lái)，幫助細(xì)胞完成一些復(fù)雜的生化反應(yīng)。

脂滴看起來(lái)很小，但它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的重要性不可小覷。當(dāng)人體內(nèi)能量供應(yīng)充足的時(shí)候，脂滴會(huì)不斷地增加，以儲(chǔ)備能量；而當(dāng)人體需要能量的時(shí)候，脂滴又會(huì)迅速地釋放出來(lái)，為身體提供能量支持。

那么，脂滴在我們的身體里面到底長(zhǎng)什么樣呢？其實(shí)，它們的外觀有點(diǎn)像一個(gè)個(gè)小圓球，通常都位于細(xì)胞的中央?yún)^(qū)域，但也會(huì)分布在整個(gè)細(xì)胞內(nèi)。如果你有看過(guò)一些細(xì)胞結(jié)構(gòu)的圖像的話，你會(huì)發(fā)現(xiàn)，脂滴通常會(huì)在圖像上顯示成一個(gè)個(gè)小點(diǎn)點(diǎn)，而且數(shù)量通常也很多。小小脂滴如何檢測(cè)呢？

1.     C11 BODIPY 581/591

C11 BODIPY 581/591 (Catalog No.: GC40165) 是一種 BODIPY 氟硼熒衍生物，具有良好的光穩(wěn)定性、低熒光偽影特質(zhì)。C11 BODIPY 581/591 常用于活細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化比率和抗氧化性能的研究，或與羥基自由基反應(yīng)、檢測(cè)鐵死亡 (ferroptosis)。C11 BODIPY 581/591 發(fā)射波長(zhǎng)為 591 nm (還原型)，或紅移至 510 nm (氧化型)；激發(fā)波長(zhǎng)分別為 581 nm (還原型)、500 nm (氧化型)。

2. BODIPY 493/503

BODIPY 493/503 (Catalog No.: GC42959) 是一種親脂性熒光染料，發(fā)出亮綠色熒光，已廣泛用于脂質(zhì)滴標(biāo)記（Ex/Em:493/503 nm）。BODIPY 493/503與熒光、共焦和雙光子顯微鏡以及流式細(xì)胞儀兼容，可用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞。

1. 在與研究相關(guān)的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)細(xì)胞。 （例如，35 mm 孔中有 50,000 個(gè) A498 細(xì)胞。）

注意：細(xì)胞與 30 μM 油酸一起孵育過(guò)夜可作為增加中性脂質(zhì)含量的陽(yáng)性對(duì)照，因?yàn)橛退崾歉视腿ズ铣珊蛢?chǔ)存的有效誘導(dǎo)劑。 不含脂肪酸的 BSA 作為對(duì)照。

2. 在感興趣的時(shí)間點(diǎn)，在 PBS 中制備 2 μM BODIPY 493/503 染色溶液。

3. 使用 3 ml PBS 快速漂洗細(xì)胞以去除培養(yǎng)基/血清。

4. 在 BODIPY 493/503 染色液中于 37 °C 避光孵育 15 分鐘。 包括用于流式細(xì)胞術(shù)的未染色控制。

5. 使用 3 ml PBS 快速漂洗細(xì)胞以去除染色液。

6. 用胰蛋白酶消化細(xì)胞以產(chǎn)生單細(xì)胞懸液。 對(duì)于本協(xié)議中使用的 A498 細(xì)胞系，細(xì)胞在 37°C 下與胰蛋白酶-EDTA（0.25%）孵育 5 分鐘。

7. 加入 5 ml PBS 并將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到 15 ml 錐形管中。

8. 以 250×g、5 分鐘、4 °C 沉淀細(xì)胞。

9. 吸出上清液，用 3 ml PBS 快速漂洗細(xì)胞沉淀，并以 250 × g，5 分鐘，4 °C 沉淀細(xì)胞。

10. 小心吸出上清液并在 300 μl 1x 流式細(xì)胞術(shù)緩沖液中重懸細(xì)胞。

11. 將細(xì)胞懸液通過(guò) 35 μm 過(guò)濾器放入 FACS 管中。

12. 進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)。 每個(gè)條件至少獲得 10,000 個(gè)事件。

13. 將數(shù)據(jù)分析為平均熒光或?qū)?shù)據(jù)顯示為直方圖。

3. Oil Red O

油紅 O （Catalog No.:GC25676）是一種溶血色素（脂溶性染料）重氮染料，用于冷凍切片上的中性甘油三酯和脂質(zhì)以及石蠟切片上的一些脂蛋白的染色。 它具有紅色粉末的外觀，最大吸光度為 518 納米。

4. 其他脂滴熒光探針

所以，小伙伴們，現(xiàn)在你們已經(jīng)知道了脂滴是什么了，它們是細(xì)胞內(nèi)的重要組成部分，不僅僅是能量?jī)?chǔ)備庫(kù)，還能幫助細(xì)胞完成很多生物學(xué)功能。是不是覺得很神奇呢？趕快去看看你身邊的細(xì)胞，是不是也有一些小小的圓圓的小球球在里面跳。

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