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細胞培養常見問題及解答(一)
發布時間: 2021-12-09 點擊次數: 1279次1. 如何選用特殊細胞系培養基?
培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之,首先選MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養是一個好的開始。
2. 何時須更換培養基?
視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數據上的更換時間,按時更換培養基即可。
3. 可否使用與原先培養條件不同的培養基?
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養基,若驟然使用和原先提供的培養條件不同的培養基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活。
4. 可否使用與原先培養條件不同的血清種類?
不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清,,在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
5. 何謂FBS, FCS, CS, HS ?
FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思,兩者都是指胎牛血清,乃錯誤的使用字眼,請不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。
6. 培養細胞時應使用5% 或10% CO2?或根本沒有影響?
一般培養基中大都使用HCO3-/CO3 2-/H+ 作為pH 的緩沖系統,而培養基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養時應使用的CO2 濃度。當培養基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時,細胞培養時應使用10% CO2;當培養基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時,則應使用5% CO2 培養細胞。
7.Hank's 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用,不需要CO2培養箱。原因是什么?Hank's 平衡鹽溶液(HBS)和Earle's平衡鹽溶液(EBS)有什么本質的功能差別?
HBS和EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles (2.2 g/L)中比在Hanks (0.35 g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中,溶液會變堿,Hanks液在CO2培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織,需要用Eagles液,如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織,用Hanks液就可以了。
8. 什么是細胞的接種密度?
依照細胞株基本數據上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。
9. 懸浮性細胞應如何繼代處理?
一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養液太多時,可將培養角瓶口端稍微抬高,直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞的培養液至另一新的培養角瓶,加入新鮮培養基稀釋至適當濃度,重復前述步驟即可。
10. 冷凍管應如何解凍?
取出冷凍管后,須立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時,必須注意安全,預防冷凍管之爆裂。
11. 細胞冷凍管解凍培養時, 是否應馬上去除DMSO?
除少數特別注明對DMSO 敏感的細胞外,絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞),在解凍之后,應直接放入含有10-15 ml新鮮培養基的培養角瓶中,待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附的問題。
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