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    細胞為何總是抱團生長?

    發(fā)布時間: 2021-10-08  點擊次數(shù): 3521次

    細胞為啥總是一言不合就抱團生長?!

    是細胞污染了還是正常現(xiàn)象?

    是消化不好了還是鋪板有問題?

    抱團細胞越來越多,怎么樣才能讓細胞分開生長?

    請認真閱讀以下干貨,看看能否幫您答疑解惑!


    細胞抱團一定代表細胞狀態(tài)不好嗎?

    細胞生長的時候肯定是要相互聯(lián)系,大部分的細胞都是要成片生長的,應該仔細觀察每種細胞的狀態(tài),抱團并不一定代表不好:


    1、若細胞輪廓清晰,可看清楚一個個的細胞,像葡萄一樣,一串串的,就是狀態(tài)好的,說明細胞在分裂。

    2、但大部分細胞抱團絕對不是一件好事!如果輪廓消失,出現(xiàn)細胞融解或細胞變灰暗、透光性變差,就是細胞死亡了。葡萄狀和抱團,在鏡下其實很容易區(qū)別。抱團死亡的細胞可以看到細胞碎片,如下圖:

    細胞為何總是抱團生長?

    ▲RAW264.7細胞-正常狀態(tài)

    細胞為何總是抱團生長?

    ▲RAW264.7細胞-異常狀態(tài)

    細胞為何總是抱團生長?

    ▲H9c2細胞-正常狀態(tài)

    細胞為何總是抱團生長?

    ▲H9c2細胞-異常狀態(tài)


    3、細胞抱團是因為細胞污染了嗎?一般細胞培養(yǎng)液清亮,就不是污染。如果是污染了的話,可以通過觀察培養(yǎng)液顏色,若污染,則很渾濁。


    細胞為啥總是喜歡抱團?

    • 細胞死亡釋放出DNA,纏繞其他細胞,形成黏性的細胞團(消化的過程可能過于粗暴,吹打太用力,消化太久,消化液太強或有毒性等)。

    • 細胞離心速度過大或時間太長。

    • 消化不*的時候,細胞和細胞之間的連接沒有分開;消化過度的時候,圓形的細胞容易聚堆,再分開很困難!

    • 狀態(tài)不好、老化的細胞,也可能會出現(xiàn)抱團生長的情況(比如換液不及時、長的太滿才傳代、污染等造成的細胞狀態(tài)差)。

    • 傳代時沒有吹打均勻,細胞團多,培養(yǎng)時就會是一團一團的。

    • 傳代后細胞鋪板不均勻。

    • 有可能是雜細胞,或者死細胞。

    • 細胞未消化開。

    • 非震蕩培養(yǎng)或細胞量過多的話就會成團。


    如何避免細胞抱團?

    • 用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞。

    • 對于貼壁非常牢固的細胞(如MDCK),為了細胞更好的狀態(tài),更漂亮的樣子,建議分多批多次消化,這樣才能最大限度地降低胰酶對細胞的損傷,保證細胞的狀態(tài)能夠*。

    • 細胞生長密度不要太高,70%-80%就好(細胞剛剛基本成單層細胞,沒有出現(xiàn)堆疊生長),這樣細胞抱團的幾率就大大減少了。如果細胞已經(jīng)長成集落,可先將細胞低密度傳代,第二天再消化傳代,這樣連續(xù)傳三次,細胞抱團就會越來越小,這樣幾代過后,再按照常規(guī)消化方法和時間能將細胞逐漸傳成單個的。

    • 消化過程中最好不要使勁搖動培養(yǎng)瓶,這樣細胞特別容易成屑樣脫落。細胞一旦脫落入懸液里就很難再將他吹打成單個(因為細胞沒有受力點了,所以細胞很難分散開)。所以必須要在細胞未脫落之前將其吹打開,嚴格控制好消化程度。

    • 消化過程需要使用槍頭輕輕吹打,切忌使勁拍培養(yǎng)瓶的側(cè)壁。拍瓶子想要將細胞拍散的力度對于細胞來說相當于大地震,細胞本身是無法承受如此振蕩的。


    細胞抱團了,要如何處理?

    • 如果細胞抱團不影響生長就沒問題,只是計數(shù)的時候要麻煩點了。

    • 如果感覺有死細胞的DNA,在細胞懸液中加入幾滴無菌的DNAse(1mg/ml溶于水)將DNA鏈打斷。輕柔地吹打細胞,防止對細胞膜造成物理損傷。

    • 如果細胞抱團是肉眼可見的,那就讓細胞靜置半分鐘左右,然后吸取上半部分沒有抱團的細胞懸液來傳代。如果細胞抱團肉眼不可見,那可能沒有特別好的分離方法,只能等細胞狀態(tài)改善后將這部分細胞慢慢排除出去。


    ☆ 如若需要細胞進行抱團,那么該如何處理呢?

    以MSC誘導成軟骨方向分化為例:可使用96孔板,每個孔板接種30萬個細胞。



    總結(jié)

    引起細胞抱團的根本原因是細胞狀態(tài)變差,且在吹打細胞的時候,那些狀態(tài)好的細胞也會因為多次吹打而受損,所以我們認為最根本的解決方法是摸透培養(yǎng)的細胞的生長習性,讓細胞保持較好的生長狀態(tài)。




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